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什么是多光子激光掃描顯微鏡?

更新時間:2024-11-08      瀏覽次數(shù):63

多光子激光掃描顯微鏡(Multiphoton Laser Scanning Microscopy,簡稱MPLSM)是一種先進的光學顯微技術(shù),它利用兩個或多個光子同時被樣品吸收的非線性光學過程來激發(fā)熒光,從而實現(xiàn)對生物樣品深層結(jié)構(gòu)的高分辨率成像。與傳統(tǒng)的光學顯微鏡相比,多光子顯微鏡具有更深的穿透力、更少的光毒性以及更高的空間分辨率等優(yōu)點,特別適用于活體細胞和組織的長時間觀察。

原理

多光子顯微鏡的核心原理是多光子吸收。在傳統(tǒng)的單光子激發(fā)中,一個高能量的光子被熒光分子吸收,激發(fā)熒光。而在多光子吸收中,兩個或多個低能量的光子幾乎同時被同一個熒光分子吸收,其總能量相當于一個高能量光子的能量,從而激發(fā)熒光。這一過程通常發(fā)生在激光聚焦點處,因此具有很高的空間選擇性。

關(guān)鍵組件

多光子顯微鏡的關(guān)鍵組件包括:

激光器:通常使用飛秒脈沖激光器,因為其短脈沖寬度可以提供高能量密度,有利于多光子吸收過程。

掃描系統(tǒng):包括掃描鏡和光路系統(tǒng),用于控制激光束在樣品上的掃描路徑。

探測器:用于收集樣品發(fā)出的熒光信號,并將其轉(zhuǎn)換為電信號,最后形成圖像。

光學元件:如物鏡、分光器等,用于聚焦激光和收集熒光。

優(yōu)勢

多光子顯微鏡相較于其他顯微技術(shù)具有以下優(yōu)勢:

深層成像能力:由于使用的是紅外光,其散射和吸收較小,因此可以實現(xiàn)對樣品較深層結(jié)構(gòu)的成像。

減少光毒性:由于激發(fā)僅限于激光聚焦點,減少了對樣品的光損傷和光毒性,適合長時間觀察活體細胞。

提高分辨率:多光子激發(fā)的熒光僅在焦點處產(chǎn)生,因此具有天然的光學切片能力,可以實現(xiàn)三維成像。

減少背景信號:由于激發(fā)僅限于焦點處,因此背景信號較低,提高了圖像的對比度。

應(yīng)用

多光子顯微鏡在生物醫(yī)學研究領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用:

神經(jīng)科學:用于觀察活體大腦中的神經(jīng)元活動和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。

腫瘤學:研究腫瘤微環(huán)境和血管新生。

發(fā)育生物學:觀察胚胎發(fā)育過程中的細胞動態(tài)。

免疫學:研究免疫細胞在組織中的行為。

結(jié)論

多光子激光掃描顯微鏡是一種強大的成像工具,它通過多光子吸收原理,克服了傳統(tǒng)顯微鏡的局限性,為生物醫(yī)學研究提供了新的視角。其在深層成像、減少光毒性、提高分辨率等方面的優(yōu)勢,使其成為研究活體組織和細胞的技術(shù)之一。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和優(yōu)化,多光子顯微鏡將在未來的科學研究中發(fā)揮更加重要的作用。

 


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